Méthodes horizontales d'analyse moléculaire de biomarqueurs — Méthodes d'analyse pour la détection des organismes génétiquement modifiés et des produits dérivés — Partie 4: Méthodes de criblage par PCR en temps réel pour la détection des séquences ADN P-nos et P-nos-nptII

L'ISO/TS 21569-4:2016 spécifie un mode opératoire permettant la détection d'une séquence d'ADN de la région du promoteur du gène codant la nopaline synthase (P-nos) d'Agrobacterium tumefaciens et un mode opératoire permettant la détection de la séquence d'ADN de transition entre le P-nos et le gène de la néomycine phosphotransférase (nptII) du transposon Tn5 d'Escherichia coli K12. Le promoteur nos et le construit P-nos-nptII sont fréquemment observés dans les plantes génétiquement modifiées. Les méthodes spécifiques de P-nos et P-nos-nptII sont basées sur une méthode par PCR en temps réel et peuvent être utilisées à des fins de criblage qualitatif. Pour l'identification et la quantification d'une plante génétiquement modifiée (événement) spécifique, une analyse complémentaire doit être effectuée.

Les méthodes décrites sont applicables à l'analyse de l'ADN extrait de produits alimentaires. Elles peuvent être également utilisées pour analyser l'ADN extrait d'autres produits tels que des aliments pour animaux et des semences. L'application de ces méthodes exige qu'une quantité adéquate d'ADN amplifiable soit extraite de la matrice étudiée.

La séquence d'ADN amplifiée par la méthode spécifique à l'élément P-nos peut être détectée dans des échantillons contenant l'ADN du plasmide Ti d'A. tumefaciens présent dans la nature. Pour cette raison, il est nécessaire de confirmer un résultat positif de criblage. D'autres analyses sont nécessaires au moyen de méthodes spécifiques aux construits ou spécifiques aux événements.